
判斷Anti-ACA11蛋白降解程度,可通過?「外觀初篩→內參驗證→靶標信號比對」?三步精準判定,結果對應清晰的降解等級:
第一步:外觀快速初篩
先觀察蛋白樣本的狀態,初步劃分等級:
?正常無降解?:蛋白溶液澄清透明,無渾濁、沉淀或絮狀物
?可疑降解?:溶液輕微渾濁,無明顯沉淀
?明確重度降解?:出現明顯沉淀、絮狀物,溶液分層
第二步:內參WB驗證(核心判定依據)
將待測樣本和?新鮮提取的同來源正常樣本?同時跑WB,檢測擬南芥管家基因內參(Actin/UBQ,約40kDa)
第三步:結合Anti-ACA11靶標信號確認
因為ACA11是低豐度膜蛋白,比內參更易降解,需要補充靶標結果修正判定:
內參正常,但ACA11信號比新鮮樣本下降超過50%:判定為輕度-中度降解
內參正常,但ACA11無信號:判定為中度降解
內參已經模糊彌散,ACA11無信號:直接判定為重度降解
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